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            關于細胞為什么會衰老,怎么可以檢測出來

            更新時間:2024-03-04      瀏覽次數:34

            ◆細胞為什么會衰老:

            1、過量的大分子交聯是衰老的一個主要因素,如DNA交聯和膠原膠聯均可損害其功能,引起衰老。

            2、細胞代謝產物積累至—定量后會危害細胞,導致細胞的衰老。

            3、自由基含有未配對電子,具有高度反應活性,可引發鏈式自由基反應,引起DNA、蛋白質和脂類,尤其是多不飽和脂肪酸等大分子物質變性和交聯,損傷DNA、生物膜和重要的結構蛋白和功能蛋白,從而引起衰老各種現象的發生。

            4、存在于細胞內部提供能量的線粒體,其遺傳基因很容易發生突變,變異的積累很可能是人體老化的原因之—。

            細胞衰老是細胞在正常環境條件下發生的功能減退、逐漸趨向死亡的現象。怎么可以檢測出來細胞衰老呢?按照以下檢測方法步驟操作可以檢測出細胞衰老:

            ◆細胞衰老檢測方法與步驟:

            (1)細胞接種前在6孔培養板中預先放置滅菌的細胞片,每孔加入1×10E5個細胞,37℃ 5% CO2條件下培養過夜,使細胞在細胞片上生長。

            (2)在超凈工作臺中吸棄6孔培養板中的培養液,加入×1 PBS,洗滌細胞1次,隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,室溫條件下固定3~5分鐘。

            (3)吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,加入×1 PBS,洗滌細胞3次,每次3分鐘。

            (4)吸棄×1 PBS,加X-Gal溶液以浸沒細胞片為宜,37℃孵育4~8小時或過夜,用保鮮膜包被6孔培養板以防染液蒸發。

            (5)取出細胞爬片,去離子水沖洗2次,再次用固定液固定4分鐘,流水輕輕沖洗。

            (6)將細胞爬片按此順序脫水、透明∶95%酒精I(2分鐘)→95%酒精Ⅱ(2分鐘)→100%酒精I(2分鐘)→100%酒精I(5分鐘)→二甲苯I(2分鐘)→二甲苯Ⅱ(2分鐘)。

            (7)中性樹膠封片。

            (8)在普通光學顯微鏡下觀察衰老細胞形態。

            每張片子鏡下計數400個細胞,確定X-Gal染色陽性細胞(衰老細胞)在細胞群體中的所占的百分比即衰老細胞率(藍染細胞數/總計細胞數×100%)。

            ◆細胞衰老檢測注意事項:

            ①X-Gal溶液需要現用現配。

            ②細胞固定時間過長或固定之后清洗不干凈,均會影響后續的酶反應。

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